慢病毒包裝服務的幾個關鍵節點就是細胞因素、載體系統（盡量使用成熟的商業化載體系統）、構建重組的質粒正確與否、質粒抽提純化情況、包裝轉染控制（24、48小時的細胞及熒光狀態判斷）、目的基因對病毒包裝影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會影響到是否能包裝成功）。為什么都是采用同樣的慢病毒包裝系統，別人次次成功，我的不是滴度低就是穩定性差？這是因為除了包裝系統本身，LV的包裝還與下列幾個因素密切相關：

 

　　1)細胞狀態：LV的包裝一般使用293T細胞，293T細胞的活力、生長狀態，是否處于對數生長期、鋪板是否均勻等對病毒的產量影響很大，并控制轉染前密度為50~60%。

 

　　2)目的基因：目的基因的大小、序列及翻譯的蛋白是否含有毒性均會影響包裝效果；例如，若目的片段較大（＞2.5k），則可能會導致包裝滴度下降，甚至無法包裝。某些過表達會產生細胞毒性的蛋白，可能會導致細胞異常從而出毒量低（可考慮更換為腺病毒）。

 

　　3)質粒質量：做好陰性對照（GFP組），確保包裝目的基因的載體構建的完整性，并做好純化。

 

　　4)收毒時機：轉染后24、48h觀察細胞生長狀態及熒光狀態，生長狀態良好一般于48h第一次收集病毒上清，換液后于72h再次收集病毒上清。